初步纯化后蛋白质样品 用凝胶过滤层析法检测显示只有一条带,是否说明只含一种蛋白质

如果用的是SDS－PAGE胶.则25kda的可以用14％聚丙烯酰胺,其他80以上的可以用8－10％的.

是,分子筛.

有胰岛素纯化经验的一般都能处理多肽.用蛋白酶处理的方案,产物的量都很小,做起来成本高.我们测N/C端得样品都是送到北京军科院和上海中科新生命,简单的预处理他们可以做的.胰岛素两条链拆分也能做的,关键可

大分子物质由于直径较大,不易进入凝胶颗粒的微孔,而只能分布颗粒之间,所以在洗脱时向下移动的速度较快.小分子物质除了可在凝胶颗粒间隙中扩散外,还可以进入凝胶颗粒的微孔中,即进入凝胶相内,在向下移动的过程

蛋白质分离纯化常用方法有：1、沉淀,2、电泳：蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中是带电的,在电场中能向电场的正极或负极移动.根据支撑物不同,有薄膜电泳、凝胶电泳等.3、透析：利用透析袋把大分子蛋白质与

应该是两条带吧,一条是核基因,一条是质粒,但是如果有些噬菌体的质粒丢失的话,可能那条带不明显吧

SDS-PAGE、琼脂糖

透析是利用半透性膜将待纯化蛋白质包裹,沉浸在缓冲液中；由于缓冲液浓度低于膜内部的浓度,因此在半透膜上会发生物质交换；但蛋白质不能通过半透膜,只有盐离子等小分子物质可以通过；因此,待纯化蛋白质中的盐杂质

选c亲和柱/亲和膜,都是医用分离器.如除内毒素亲和柱,以Sepharose4B为基质,配基为组氨酸,壳聚糖,季铵盐等

所有的层析在原理上都是相通的,区别在于流动相和层析剂之间的作用力的不同.离子交换是利用蛋白质表面的电荷与层析剂上的离子基团的静电作用.凝胶过滤层析利用了凝胶的多孔性,根据溶剂分子的大小进行分离.

一下给你提供一些蛋白质进行分离纯化的常规方法,请你自己根据方法设计实验吧蛋白质分离纯化常用技术有：1、沉淀,2、电泳：蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中是带电的,在电场中能向电场的正极或负极移动.根据

蛋白质的形状影响凝胶过滤时候的行为,分子形状长的蛋白质在凝胶过滤的时候有类似于分子较大的蛋白的行为,用SDS-PAGE测定的蛋白质分子量应该比较准确,因为变形后的蛋白质迁移速度只取决于蛋白质分子大小

二者均不能.需要考虑纯化的原理.柱层析法的原理是根据蛋白质的分子量来进行纯化,所以可能存在和目的蛋白相同分子量的杂蛋白.（不考虑蛋白之间的相互作用）证明方法：可以用某种特定的蛋白酶去切蛋白质样品.切完

目的蛋白才16kDa,有些小,但是可以分出来,所用的方法是1加大凝胶的浓度2缓冲液用Tricine而不是Tris

不对1、不能判断电泳条带中的蛋白是否是目的蛋白,如果要准确判断,除了对比marker的分子量,还需要进行westernblot.2、不能判断所得条带是否只含有一种蛋白,也许有相似分子量的其他蛋白也混在

您要这道其中的原理就理解了.凝胶过滤时小分子进入凝胶的孔隙,大分子则直接洗脱,所以大分子先出来.电泳是利用蛋白质带电荷受到电场力和凝胶阻滞的作用,大分子当然跑得慢了.这两种胶是完全不同的,虽然中文翻译

二巯基丙醇的作用是断裂多肽链之间的二硫键（共价键）,故5000的蛋白质由2条多肽链通过二硫键结合而成.盐酸胍的作用断裂蛋白质之间的氢键,而不会破坏蛋白质之间的共价键,改变蛋白质的空间结构.使蛋白质由多

不知道你用的是什么柱子.如果是带转接头的柱子,漏水的原因可能是转接头的珐琅没有拧紧,或者是密封圈老化.另外一个原因是可能压力过大,超过了柱子的承受压力.建议你仔细检查,降低流速.

因为我们通常得到的蛋白初级都是由菌体发酵而来的,得到的蛋白多是有很多杂蛋白（可以通过SDD-PAGE电泳直接看到）,所以对于我们需要的目的蛋白需要通过具体的纯化过程,蛋白的纯化也是根据目的蛋白的特性来

首先琼脂糖凝胶可以排除,这是大孔凝胶,用于分子量较大的成分.我做分子筛用的比较多的柱子都是葡聚糖凝胶凝胶,我的蛋白比你的大,用G50和G100的填料,做的结果都没什么问题.你的蛋白7kD,如果没有什么