动物实验做PCR需要每组都测吗
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/06/24 00:14:34
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PCR仪,abgene的,十万左右吧,电泳仪,一般生物公司的几千块足够了.凝胶成像仪,好点的几万足够了,差点的几千块就够了.就这几样了,挺便宜的,入门很低
1做标曲才可以算出这对引物的扩增效率(其斜率),方便用pfaffl方法来进行相对定量(得到的结果相对精确一点),否则只能默认扩增效率为2,用2^-ddCt(Livak)法来计算2做标曲才可以绝对定量.
PCR是一种体外DNA扩增技术,是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下,依赖于DNA聚合酶的酶促合反应,将待扩增的DNA片段与其两侧互补的寡核苷酸链引物经“高温变性——低温退火——引物延伸”
北京的阅微基因不错.
模板使用量(要让各样本调到类似的浓度,一般用内参引物调),扩增循环数(一定不能到平台期)
在百度知道里怎么会问这个问题?都有专业的书籍或者文献可供参考的.不同的试剂公司还有荧光定量的培训PPT,你需要的话我可以给你发过去.
说一下自己做实验时候用到的东西,血液提取mRNA还是采用试剂盒来提取,手工法极不推荐,但是试剂盒还是蛮贵的,可以问一下天根公司,价格还算可意,效果也不错.逆转录过程可以用Fermentas一款逆转录试
我的印象是,PCR实验更强调每一次的操作,而不是定期的大规模清理.我觉得比较重要的是隔离的概念.一是每个人的实验用区域如果能有一定区分,每人对自己使用的实验桌表面有完全的控制,能够减少很多污染的机会.
PCR必须有模板. 通过RT-PCR获得胰岛素cDNA很麻烦,因为表达胰岛素mRNA的组织或细胞非常局限.你要么需要找到人的B细胞系(这个细胞系不好要也不好养),要么需要联系医院获得人的胰腺组织.这
我们一般一种细胞要6孔板的3个孔铺满,达到10的7次方左右
你在哪里啊,一般的医学院都可以的.
是做RT-PCR吧?一般来说需要反转录酶、Taq酶,dNTP,缓冲液、引物和各种离子等.
酶可能会有影响,有可能活性降低,其他dNTP、buffer等影响不大再问:就只有Taq酶吗?引物也没啥影响吗再答:放在冰盒内没什么影响,只要不是在常温下放着
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和缓冲液(其中需要二价Mg离子).
反转录PCR和普通PCR没区别,只要你的cDNA可以,53或54都行,用TAKARA的EXTAQ的话可以94度4min之后94度30秒,53度30秒,72度1分钟,循环35-39吧,72度10分钟.其
新出来的药,高尖端的医学,物理,生物等都做.一些危险的实验也靠它们来做前锋.
有一定的影响,一可以影响反映体系的PH,二影响酶的活性.做PCR的DNA量理论上只要很少,具体的建议您可以选择做梯度后选择效果较好的.原则上少一点,PCR的效果好些,但不能太少.
最好用新鲜的组织,如果不能立即使用就用液氮迅速冷冻,组织在冷冻前最好切成小块分开保藏,避免反复冻熔,一个PT-PCR反应不需要多少RNA,因此不要搞好大一块组织,只要黄豆大小一块足够了,一般组织块加入
一个合格的兽医,临床手术是必备技能,大量的解剖经验积累造就日后工作中临床能力.关于能不能下去手,你要换个角度想想,它身上的有块腐肉,你要切掉的话,它就能活命,不切掉会去见上帝,你会下手么?你现在只是空