构建质粒

你需要的是理解:DNA是双链的吧.比如说左边一条是1的,右边的是2的.121212121212那么上下隔开1与1间就要用DNA聚合酶``连接单个链上的DNA片段左右1和2的就需要DNA连接酶```连接

ThisaritclethroughthestepssuchasPCR,transformation,distillingplasmid,EcoRI,connectingmainlinks,purif

质粒是一个闭合的DNA圆圈,你得先切开它,把它切成一条线；然后你再从一长串DNA上切下你要的目的片段,用连接酶像胶水一样,吧质粒的两端和目的片段的两端连接起来——又成一个圆圈了,但是这次这个DNA圆圈

把目的基因放入pfastbac多克隆位点,转DH10bac,重组后挑阳性克隆,抽提bacmid,再转昆虫细胞.不知道你想具体问什么,商品有详细的说明和protocol,一看就知道

①质粒

标记基因的作用很关键.拿抗青霉素标记来说,只有对青霉素有抗性的菌体,才能在含有青霉素的培养基上生长繁殖.其它的杂菌和没有转化成功的受体菌,都不能生长.这样的话,用含有青霉素的培养基去培养,长出来的肯定

质粒是包含有DNA的,这样就可以成为载体,另外由于质粒本身就属于胞器,与原细胞融合度非常高,所以适合作为基因表达载体.可载性、融合度高.

可以直接用DNA模板,只要DNA模板质量够好.

跟一般的片段插进质粒构建一样啊只是过表达的话扩增出来的片段必须包含该基因完整的CDS序列然后插入位点要在质粒的promoter后面序列不能有突变转染也和别的一样用Lipo啥的

你的构建策略很好,不需要用T载体.再问：为什么有的文章里面用到pMD18T这个载体呢？它是什么作用，我不太明白再答：　　pMD18T是个T载体。如果PCR产物直接双酶切效果不好，可以先把PCR产物放到

重组时选择你的目的基因上没有,而质粒的多克隆位点上有的酶切位点,一般重组质粒需要两个酶,所以你要选择两个酶切位点,注意尽量避免使用切出平末端的酶.重组引物设计时首先你要确定你选择的两个酶在的酶切位点在

构建之后,这三种情况都是存在的,然后先把这所有的全部导入细胞（当然不是同一个细胞）,在质粒上会有某种抗性基因,就加入这种抗性基因（比如它抗某种抗生素,就加入这种抗生素,含目的基因—目的基因的这种重组片

限制酶连接酶作用于磷酸二子键

百度文库搜索质粒构建和引物设计即可,很详细.引物设计的原则引物设计有3条基本原则：首先引物与模板的序列要紧密互补,其次引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构,再次引物不能在模板的非目的位点引发D

如何遗传?重组质粒,即基因载体.是一个复制子,在细胞内可以自主复制,细胞分裂时,质粒随机分配进入子细胞,类似细胞质的母性遗传（如线粒体、叶绿体等）.如何检测?质粒的检测因质粒性质不同而不同,一般人工质

哈哈,我就是做这个的,因为基因直接克隆出来,酶切得不太好,而且也不容易连到PET上面,而PMD是克隆载体,上面添加了多聚T,PCR的产物末端通常会多P出几个多聚A,A和T互补,再用连接液连接,就非常容

动物病毒.原因：它的遗传物质可以在动物细胞内正常表达.再问：λ噬菌体衍生物为什么不能用？再答：质粒：一般用于克隆载体，且是在原核细胞中。植物病毒：转染植物，不能转染动物细胞。λ噬菌体衍生物：由天然λ噬

southern是检测你的目的基因是否转入受体即你的转基因植物中,在插入了目的基因的表达载体中应该可以检出你的目的基因,但这并不意味着你的目的基因就一定会成功的转入植物中.不知你转的是什么植物,如果你

选择合适的表达质粒如pET系列,再选择合适的两个酶切位点,先从T载体上切下基因,与酶切好的表达质粒相连,就好了

什么基因?什么质粒?正常情况不用这样做的一般做表达用的基因片段是需要测序鉴定的连T载体就是为了去测序,证实你扩增片段没有突变且是你需要的目的片段然后再去连接你的目的载体就ok了