考马斯亮蓝蛋白质组分的测定步骤小木虫-搜答案-百度作业网

首先所有使用玻璃器皿都要洗干净.1、考马斯亮蓝应在乙醇、磷酸介质中尽量溶解充分.然后过滤定容摇匀.2、用固定的2个比色杯做标准空白比色杯固定,每次测完后用乙醇将测定A值的比色杯洗干净.我测定的r值在0

考马斯亮蓝G250具有红色和蓝色两种色调.在酸性溶液中,其以游离态存在呈棕红色；当它与蛋白质通过疏水作用结合后变为蓝色.它染色灵敏度高,反应速度快,约在2分钟左右时间达到平衡,在室温一小时内稳定.在0

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去污剂,碱液,还有碱性的多糖壳聚糖等会影响测定；蛋白标准液最好现配现用；平行操作；显色后在半小时内测完

调零当然是用染色剂了,加和蛋白一样的水.商品化的和我们自己配的颜色都不一样,我们自己配的就是有点发青,用起来还是蛮不错的,和BCA的试剂盒差不多,蛮不错的.

Bradford法的突出优点是：（1）灵敏度高,据估计比Lowry法约高四倍,其最低蛋白质检测量可达1mg.这是因为蛋白质与染料结合后产生的颜色变化很大,蛋白质－染料复合物有更高的消光系数,因而光吸收

蛋白质所测的OD值一定要位于标准曲线范围内,因为G-250的曲线随着蛋白浓度增高有些略微偏离线性,若蛋白质浓度太高,可适当稀释后再测.此外,用于标准样品的牛血清白蛋白组分V最好现配现用,已经配好的溶液

公式是根据测量结果自己算出来的：考马斯亮蓝比色法是由Bradford等人建立的1种测定微量蛋白质的方法L5],考马斯亮蓝所含疏水基团在酸性条件下与蛋白质的疏水微区具有亲和力,通过疏水作用与蛋白质相结合

1、抢存在问题2、分光光度计的问题,本来显示的就不是很稳,可多次测量取平均3、只要大于0.9950就可以了

会的.不仅碱性氨基酸,去垢剂,如SDS,还有高浓度的缓冲液都会有影响.而且由于蛋白质酸性,碱性氨基酸含量不同,即使蛋白质浓度相同,所测出的值也会不同.

最好是再用其他方法进行验证.比如用BCA法.

裂解液（10mL）：7mol/L尿素,4.2g；2mol/L硫脲,1.522g；4%CHAPS,0.4g；50mmol/LDTT,0.075g；0.5%CA(两性电解质),125微升；100mmPMS

可溶性蛋白质含量的测定——考马斯亮蓝法一、原理考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种.考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色,最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色,蛋白质

将100mg考马斯亮蓝G-250溶于50m195％乙醇,加入100ml浓磷酸,然后,用蒸馏水补充至200ml,此染液放4℃至少6个月保持稳定.—————————————————————————————

Folin酚法最好,准确度最高；双缩脲法最差,准确度最低；现很少用；考马斯亮蓝G250法介于两者之间.

有问题的地方基本排除了我只能想出一个问题就是要加强操作别的我也不知道了

考马斯亮蓝测定蛋白质浓度是较常用的方法,误差可尽量减到最小,需注意：测定OD值前,将分光光度计提前预热至少30分钟,可保证准确性；配制好的考马斯亮蓝溶液应放于4度保存备用；盐离子不会影响实验结果,但去

降低染色液浓度,缩短染色时间.考染太过,会使得所有蛋白质表面都包着厚厚的一层染料,无法定量.只有降低染色液浓度,缩短染色时间才能使得染色回到线性区域,让染料强度和蛋白质浓度成正比.

1.分光光度计预热下会准些2.是否调0\100,3.用紫外的试试看楼主可曾换一台分光光度计试试,有些仪器时间长了不准的

是液体就好测了呀把样品取出1ml,按照做标准曲线时一样的处理,再测OD值就行了

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