质粒转化大肠杆菌涂板后不长菌

首先要进行菌种活化,可以先从保存的菌种液中吸5ul,接种到加入了相应抗生素的5mlLB培养基中,200转每分钟,37摄氏度过夜.然后根据需要,如果要扩大培养,就按1:100的比例接种到大瓶的LB培养基

一般程序如下：获得目的基因－准备表达载体－将目的基因插入表达载体中（测序验证）－转化表达宿主菌－诱导靶蛋白的表达－表达蛋白的分析－扩增、纯化、进一步检测.[主要试剂主要试剂]主要试剂1、LB培养基.2

用大肠杆菌表达载体就行啊!问题就是,ORF要正确,表达的蛋白可能被降解,激素基因要把内含子去掉,启动子、终止子都要用大肠杆菌的等等.

我们也会遇到这样的问题,通常情况下,我们都是采用4℃保存,但是不超过24小时.这是我们的使用情况.

不一定.解析：作为目的基因运载体的一种,质粒被广泛适用于各种人为基因重组,其中大肠杆菌中的质粒以及农杆菌的Ti质粒最为广泛应用于转基因牛,抗虫棉,转基因羊等等家畜及农作物.再问：宿主细胞不会对导入的质

1、“切开的质粒”等于“线性DNA”.2、“线性DNA转化细菌、以及真菌的原生质体”已经成功.所以,切开的质粒能转化进入感受态细菌.但是,不能复制.如果质粒上带有与细菌染色体上同源序列,质粒可以重组交

因为这时候抗抗生素的基因还没有表达出产物,加入抗生素会把细胞杀死.不过青霉素是个例外,因为青霉素只是阻止细菌细胞壁的合成,而不是直接杀死细胞,所以它只是抑制增殖,细胞还可以存活,然后表达抗青霉素基因,

好像和试剂盒没多大关系把,只能说菌没摇好,重新准备摇大瓶把,当然如果你认为是试剂盒的问题那么可以换好点的,比如axygen,或者其他更好的

培养之后,根据质粒上的筛选标记,才能知道是否发生了转化.或者是为了让质粒在细菌中大量复制.

首先看你是否使用蓝白斑筛选,如果使用了白色菌落就行了,但是x-gal比较贵,所以很多实验室都不用,而用菌落PCR.首先配制clonebuffer,每400微升含EXtaqbuffer40微升,Mgcl

不是不限,而是没法说.问题就在于带有抗性基因的质粒能否在宿主中稳定存在以及有效表达和遗传.这就关系到质粒本身的性质和宿主菌的情况.质粒种类很多,宿主菌的类别更多了,不仅仅和菌的种类有关,同一种菌的不同

重组质粒作为一个单独的质粒进入大肠杆菌发挥作用,不需要与ecoli体内原有的质粒结合……

大肠杆菌的基因组包括两个部分：大肠杆菌染色体DNA基因组+质粒DNA基因组还不懂,就跟我聊天是菌体的一种命名方式,这个东西不用管它

大肠杆菌的天然质粒有ColE1、RSF2124、pSC101.第一个质粒有大肠杆菌素E1合成基因；第二个是第一个的派生质粒,带有一个编码氨苄青霉素抗性基因的转位子；第三个有四环素抗性基因（手机字母不好

氯化钙的确能提高转化效率质粒DNA和细胞壁表面的粘多糖都带负电荷,而二价的钙离子能促进两者的黏着,因此可以提高转化效率

冰浴是为了质粒附着在菌体表面,热击是打开通道让质粒进入,觉得LZ的做法影响不大,不过要实际验证

所谓的转化是将外源DNA分子引入受体细胞,使之获得新的遗传性状的一种手段,它是微生物遗传、分子遗传、基因工程等研究领域的基本实验技术.在自然条件下,很多质粒都可通过细菌接合作用转移到新的宿主内,但在人

影响转化效率的因素很多,主要有：感受态细胞制备的质量、受体菌生长期（大肠杆菌在对数生长期易产生感受态）、质粒的大小和构型、所用试剂的纯度、接种前菌种的保藏方式、冰浴时间（延长冰浴时间可略微提高转化率）

首先,你的质粒必须是穿梭质粒,否则不可能转的.如果是穿梭质粒的话,提取出来直接转化感受态的农杆菌就好.步骤：农杆菌感受态细胞的制备1.挑取少许农杆菌,接种于5mlLB液体培养基(含50mg/LSTR)

是F是吧～就是决定它们能不能发生接合～能结合就是能发生质粒基因的转移~