RT-PCR温度设置有什么讲究

RT-PCR和一般的PCR相比原理上没有太多的区别,无非就是在反转时候RNA的定量,不同模板的设定.对引物没有特别的要求,能特异代表目的基因就行.real-timePCR根据原理的不同,引物选择也不同

检验一下产生的扩增后的片段的长度和浓度~要是片段长度为目的片段长度或者相差不多的话,就说明扩增成功了~有的时候扩增完电泳会发现片段长度与目的基因的差了好多,那就是有问题啦~而且有的时候还会出现多条带等

用灰度分析软件统计,譬如Bio-rad的蛋白凝胶分析软件Quantity_One_v462

在做QRT-PCR时,一定要有内参,即在PCR时,每个标本都要做对应的内参,而且每次都是看家基因,一般用bate-actin,有时也用GAPDH.内参的选择：普通PCR内参的大小没有多大要求,但rea

不同的PCRMIX所设置的退火温度是不一样的,有的比最低Tm值低5℃,有的低3℃,请你参考你所买的PCRMIX的说明书,上面肯定有详细说明.一般PCR比最低Tm值低1-5℃,都没什么问题.RT-PCR

荧光定量PCR和半定量RT-PCR都可以用来检测基因的表达量的,但二者检测的东西多少有些不同.荧光定量PCR是在PCR反应体系中加入可以和双链DNA特异性结合的荧光染料（sybrgreen）或者和目的

你的一对引物的TM值最好不要超过3℃,退火温度的一般比TM值低5℃,太低的退火温度会导致非特异性的扩增反应参数可以设为：94℃2m94℃30s｝50℃30s｝30cycles72℃30s｝4℃∞若是无

问题补充：试剂盒有什么区别吗?一个可能做反转录PCR的,另一个可能H降解,留下互补DNART-PCR可能是实时PCR(real-timePCR),属于荧光定量

RT-PCR一般指的是反转录PCR.

即nestedPCR,是指利用两套PCR引物（巢式引物）对进行两轮PCR扩增反应.在第一轮扩增中,外引物用以产生扩增产物,此产物在在内引物的存在下进行第二轮扩增.由于巢式PCR反应有两次PCR扩增,从

热启动PCRTouch-downPCRRT-PCR兼并引物PCR巢氏PCR反向PCR不对称PCR原位PCR连接酶链反应RACE-PCRAFLP免疫-PCR(immuno-PCR)MSP甲基化特异PCR

有讲究的,小鸡孵化器孵化中低于某一温度胚胎发育将被抑制,要高于某一温度,胚胎才开始发育,这一温度被称为“生理零度”,也叫临界温度,一般认为鸡的生理零度约为23．9摄氏度；同时胚胎发育对环境温度有一定的

RT-PCR现在一般指反转录PCR,有时候也被说成Real-time-PCR就是实时定量PCR；Real-time-PCR就是实时荧光定量PCR,现在标准的说法是qPCR,就是定量PCR.

就就低不就高,因为温度高了会使低退火温度的引物掉下来,但是低温度不影响高退火温度的引物结合,但有可能会有非特异扩增.58度肯定可以跑出来,结果如何都是要跑胶看一看再作调整.PS：不管引物公司给的退火温

阁下所指的应该是注塑机的注塑温度控制技巧吧?一般来说,不同的注塑机确实有不同的温度控制技巧,其原因在于各电热丝温度控制很难等同,而且各温度控制器、传感器所达到的标准也很难等同.因此,也就有不同的温度控

根据cDNA序列设计就行了,不用加3‘utr,你做载体构建还是tr-pcr基因检测?再问：做rt-pcr检测。我们老板说要加上3‘utr的序列，不知道为什么？再答：不用加，我做rt-pcr检测那么多了

空调制冷的时候会将空气中的水蒸气凝结成水,减少空气的湿度.抽湿模式下室内风机固定为微风运行,不可调.这个和制冷时最关键的不同,用以减少房间温度下降（但多少也会下降）.到达你设定的温度后,会停机,待温度

说影响得看情况,退火温度太高肯定会影响引物的结合效率的.但是,实际上,好的引物一般是上下游引物的退火温度比较接近.有时候,我们可能会通过牺牲特异性的手段（当GC含量过高时,减少引物长度）来平衡两条引物

影响肯定有的,酶活会降低很多.但是如果要用还是可以用的,酶稍微多加点.但最好以后再也别放4度了

半定量和定量之间的区别.前者是通过跟内参相比,得到一个相对值.而后者是可以说能检测到扩增的每一个片段产生的信号（如用TAQMAN探针法）,所以得到是一个绝对量.当内参一致的情况下,Real-Time的