降解有机磷农药的菌种,现在平板划线分离已经做完了,怎么把菌制成菌液,怎么进一步制成粗酶液?

来源：学生作业帮编辑：百度作业网作业帮分类：生物作业时间：2024/06/05 16:18:40

用液体培养基培养,液体培养基跟你平板培养基成分可以相同,只是不加琼脂.如果你打算提取与农药降解相关的酶,那么要加入一定量的农药,诱导降解酶多表达.将液体培养基分装在三角瓶中,比如250ml三角瓶可以装100ml液体培养基,灭菌后冷却到室温,在超净工作台中用接种环（酒精灯上烧红灭菌）挑取你平板上的单菌落,接入液体培养基,三角瓶放入恒温摇床150-200转/分培养24小时左右,就制成菌液了.最好做个生长曲线.微生物实验教材上有详细的实验方法.在生长对数期的后期停止培养,离心,收集菌体,将菌体悬浮在磷酸盐缓冲溶液中,超声波破壁或冷冻研磨,再离心,上清液即为粗酶液.最好多查阅一些相关的文献,全面了解相关研究进展和实验方法,然后你做起来就得心应手了.
再问：我看了下参考文献，一种是无机盐培养基，还有一种是牛肉膏蛋白胨的培养基，我该用哪种？提取酶液时我用0.1mol/L盐酸胍，2%体积分数TritonX一100能行吗？灭菌方法可以用紫外吗？不用高温高压的话。
再答：这两种培养基各有所长，无机盐培养基+农药（唯一碳源）可以避免染杂菌，只要能生长肯定要降解农药，但是菌体生长较慢；牛肉膏蛋白胨（肉汤）培养基营养丰富，菌体生长很快，但是不一定对降解酶的表达有利，不同的菌种性质也不同，有些可能不利于农药降解基因的表达，有些还可以，总之，这种培养基有利于大量收获菌体。你不妨在无机盐培养基中加入少量肉汤培养基，比如加入5%，灭菌后加入农药，并接种降解菌，这样少量的肉汤营养物先让菌体繁殖起来，营养也就消耗差不多了，再就开始利用农药了，也诱导了降解酶基因的表达，兼顾两种培养基的优点。文献上的缓冲液可以试试，磷酸盐缓冲液比较常用，主要是要考虑酶在缓冲液中能较好地保持活性。灭菌时培养基还是高温高压灭菌比较保险，农药可以单独灭菌（比如紫外）。估计你是考虑农药高温高压容易挥发或变性。
再问：能加下您的QQ吗？还有几个小问题想请教下您，请问下，做单因素实验，有机磷农药降解菌酶效果的单因素实验，步骤是一定浓度的农药分成三组，滴入酶液，然后调PH值、和温度、然后需要等多久才能测定呢？还能做什么单因素？麻烦您了。
再答：我不用QQ，中过几次毒不用了。酶活实验条件优化，最好连续取样，调查不同时间的降解率，然后你就可以知道多久测定了。一般情况下，时间太长，酶的活性会下降。其他因素，比如：重金属对酶的抑制，农药助剂对酶活的影响，等。你可以留个邮箱，我可以邮件回复你。
再问：我的邮箱是8249299@qq.com 请问下具体可以做哪些单因素变量实验。PH值和温度能作为单因素的变量吗？

怎么做选择培养基欲从土壤中分离高效降解有机磷农药的细菌,可在培养基中加入------制成选择培养基进行分离牛肉膏蛋白胨培养基去碳怎么陪啊,我的论文需要分离一种分解农药的菌种.现在分离出了抗农药的菌种的,需要去碳用农药代替碳源. 碱性物质对有机磷农药的降解平板划线分离法分离出来的是什么菌种? 有谁知道怎么用em菌发酵玉米秸秆为驴?我买的是em菌种,制成菌液怎么样是成功的菌种是怎么分离的平板划线法,到底是怎么弄出独立菌种的啊?画几条线就行么? 有机磷类农药中毒怎么解救? 做完细菌的平板琼脂怎么处理原油平板培养基怎么制作,如何划线分离单菌落现在打五笔已经能打六十字左右了,怎么进一步提高打五笔的速度啊?mp3 请问一下平板划线分离和斜面接种的实验结果怎么描述?