人类是如何从血液中提取基因的?是谁发明了基因?(来源)
来源:学生作业帮 编辑:百度作业网作业帮 分类:生物作业 时间:2024/06/15 23:19:18
人类是如何从血液中提取基因的?是谁发明了基因?(来源)
首先用实验证明基因的化学本质就是DNA分子的是美国著名的微生物学家O.T.Avery .他和他的合作者在纽约进行细菌转化的研究,实验材料是肺炎链球菌,结果说明,使细菌性状发生转化的因子是DNA,而不是蛋白质或RNA分子.这一重大的发现轰动了整个生物界.因为当时许多研究者都认为,只有像蛋白质这样复杂的大分子才能决定细胞的特征和遗传.而Avery等人的工作打破了这种信条,在遗传学理论上树起了全新的观点,即DNA分子是遗传信息的载体.
紧接着在1952年,美国卡内基遗传学实验室的科学家A.D.Hershey和他的学生共同发表报告,肯定了Avery 的结论.他们的实验材料是T2噬菌体.
最伟大的模型在1953年被提出来了,就是DNA双螺旋结构模型,我们应该记住两位创立者的名字——J.Watson 和F.Crick .随着研究的深入,现在我们已经知道,在生物界并非所有的基因都是由DNA构成的.某些病毒和噬菌体,它们遗传体系的基础是RNA,而不是DNA.例如,A.Gierer 和G.Schramm 在研究烟草花叶病毒时,首先发现了RNA分子能够传递遗传信息,同时他们还发现烟草花叶病毒的RNA成分在感染的植株叶片中能够诱导合成新的病毒颗粒.
到现在,基因已经是以一种真正的分子物质呈现在我们面前,再也不是一种神秘成分了.科学家可以像研究其它大分子一样,客观地探索基因的结构和功能.
【血液中DNA的提取方法】
(1) 将冰冻的血在室温下溶化;
(2) 取1ml血液转入一无菌的2ml离心管中,加入等体积的PBS磷酸盐缓冲液,充分混匀后12000rpm离心5min,弃上清;
(3) 加入667µl STE,24µl的20%的SDS,37℃水浴1h;
(4) 加10µl的20mg/ml的蛋白酶K混匀,55℃水浴消化过夜(10~14h);
(5) 将消化的样品加入等体积的Tris饱和酚,充分摇匀,12000rpm离心10min;
(6) 将上层水相转入另一无菌2ml离心管中;再加入等体积的Tris饱和酚,充分摇匀,12000rpm离心10min;
(7) 将上层水相转入另一无菌2ml离心管中;并加入等体积的酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1),旋涡振荡至充分混匀,12000rpm离心10min;
(8) 将上层水相转入另一无菌2ml离心管中;并加入等体积的氯仿∶异戊醇(24∶1),充分振荡混匀,12000rpm离心10min;
(9) 将上清液转移到另一无菌2ml离心管中;加入2倍体积的冰乙醇,1/10体积醋酸钠水平摇动,直到可见絮状DNA析出;
(10) 将样品置-20℃冰箱冷冻30min或冰浴15~20min,取出后再次12000rpm离心10min,使DNA沉淀;
(11) 用枪头将DNA挑到另一无菌离心管中,用适量的70%乙醇洗涤并晃动,以洗出DNA的杂质;
(12) 倒出乙醇,将DNA用真空干燥或自然晾干,加入适量的TE缓冲液回溶,-20℃保存备用.
紧接着在1952年,美国卡内基遗传学实验室的科学家A.D.Hershey和他的学生共同发表报告,肯定了Avery 的结论.他们的实验材料是T2噬菌体.
最伟大的模型在1953年被提出来了,就是DNA双螺旋结构模型,我们应该记住两位创立者的名字——J.Watson 和F.Crick .随着研究的深入,现在我们已经知道,在生物界并非所有的基因都是由DNA构成的.某些病毒和噬菌体,它们遗传体系的基础是RNA,而不是DNA.例如,A.Gierer 和G.Schramm 在研究烟草花叶病毒时,首先发现了RNA分子能够传递遗传信息,同时他们还发现烟草花叶病毒的RNA成分在感染的植株叶片中能够诱导合成新的病毒颗粒.
到现在,基因已经是以一种真正的分子物质呈现在我们面前,再也不是一种神秘成分了.科学家可以像研究其它大分子一样,客观地探索基因的结构和功能.
【血液中DNA的提取方法】
(1) 将冰冻的血在室温下溶化;
(2) 取1ml血液转入一无菌的2ml离心管中,加入等体积的PBS磷酸盐缓冲液,充分混匀后12000rpm离心5min,弃上清;
(3) 加入667µl STE,24µl的20%的SDS,37℃水浴1h;
(4) 加10µl的20mg/ml的蛋白酶K混匀,55℃水浴消化过夜(10~14h);
(5) 将消化的样品加入等体积的Tris饱和酚,充分摇匀,12000rpm离心10min;
(6) 将上层水相转入另一无菌2ml离心管中;再加入等体积的Tris饱和酚,充分摇匀,12000rpm离心10min;
(7) 将上层水相转入另一无菌2ml离心管中;并加入等体积的酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1),旋涡振荡至充分混匀,12000rpm离心10min;
(8) 将上层水相转入另一无菌2ml离心管中;并加入等体积的氯仿∶异戊醇(24∶1),充分振荡混匀,12000rpm离心10min;
(9) 将上清液转移到另一无菌2ml离心管中;加入2倍体积的冰乙醇,1/10体积醋酸钠水平摇动,直到可见絮状DNA析出;
(10) 将样品置-20℃冰箱冷冻30min或冰浴15~20min,取出后再次12000rpm离心10min,使DNA沉淀;
(11) 用枪头将DNA挑到另一无菌离心管中,用适量的70%乙醇洗涤并晃动,以洗出DNA的杂质;
(12) 倒出乙醇,将DNA用真空干燥或自然晾干,加入适量的TE缓冲液回溶,-20℃保存备用.
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