分子荧光光谱图谱在固定波长周围总有一个强度很大的尖峰,为什么?

来源：学生作业帮编辑：百度作业网作业帮分类：物理作业时间：2024/04/28 15:33:11

分子荧光光谱图谱在固定波长周围总有一个强度很大的尖峰,为什么?
在学校用分子荧光光谱仪做实验,结果每次出来的图谱都有一个很大的尖峰,而且都在固定的波长周围,比如固定激发波长300nm,那么在300nm周围就有一个强度很大的尖峰,这是为什么啊?

这个尖峰就是激发光的信号峰.你可以试试更换激发波长,比如340 nm,再扫描一遍光谱,你会发现,这个峰的位置移动到340 nm的位置了.
一般而言,扫描荧光光谱的时候光谱扫描范围设定在比激发光波长更长的波长位置作为起点,比如你用300 nm激发样品,你的扫描范围应该从 305 nm开始或者更长,如310 nm开始.一来可以避开激发光的干扰,而来,荧光光谱的信号峰不可能出现在比激发光更短的波长范围.
再问：那我固定荧光扫描激发的时候就一定会有那个尖峰了？再问一下，我做出来的峰有许多的毛刺，狭缝宽度小了就更加明显，大了就不见了，为什吗？
再答：谁说固定荧光扫描激发的时候就一定会有那个尖峰了…… 你没有看明白我说的意思。扫描荧光光谱的时候光谱扫描范围设定在比激发光波长更长的波长位置作为起点，比如你用300 nm激发样品，你的扫描范围应该从 305 nm开始。你用300 nm的波长激发，扫描光谱从300 nm开始，当然会把激发光也采集到，于是一定就有尖峰的信号。至于荧光信号的毛刺，是不是因为你的荧光强度很弱？另外，你的扫描范围是多少到多少，狭缝大小设置的是多少？
再问：哦哦哦，知道了，荧光强度应该还好吧，扫描的范围是220nm~600nm，狭缝都是5nm，然后我改成1.5nm时，就会出现不少的毛刺，不知道为什么？
再答：你用300 nm 激发，干嘛要从220 nm开始扫描…… 小于激发波长的区域一定是没有信号的，否则就是灵异事件了。（发射光的能量一定是小于等于激发光的能量的，否则能量就不守恒了）至于毛刺，是分布在整个光谱上的吗？还是只在某些区域有？随机分布还是只在某个波段？一边而已，毛刺是衍射、或者杂散光造成的。
再问：毛刺基本上整个光谱上都有，特别是在峰上比较明显就像这样。

再答：我看不到你的荧光强度值，因为你没有显示出Y轴，可能荧光比较弱，也可能是激发光的杂散光造成的。如果你的Y轴在几百，那么建议你增大PMT的电压值。但是首先，请将检测范围放在比激发光波长更长的位置作为检测起点。

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