百度作业网实验设计：消除环状DNA载体上的酶切位点
来源：学生作业帮 编辑：百度作业网作业帮 分类：生物作业 时间：2024/04/28 02:35:03
实验设计：消除环状DNA载体上的酶切位点
某环状DNA载体上有一酶切位点,要从该载体切除该识别位点,且该位点位于某gene内,不能是其gene失活.
要求：实验原理（关键）,器材,步骤（关键）
“不能是其gene失活”写错了个字，应该是“不能使其gene失活”
更多内容起寄往我的E-mail:shiyi720#163.com(请将#换成@，为了防止垃圾邮件，呵呵)注明你的百度ID号，我采用后好给你加分！
某环状DNA载体上有一酶切位点,要从该载体切除该识别位点,且该位点位于某gene内,不能是其gene失活.
要求：实验原理（关键）,器材,步骤（关键）
“不能是其gene失活”写错了个字，应该是“不能使其gene失活”
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环状DNA载体,那就是质粒,或者粘粒什么的了.
如果购买的是商业用载体的话,如果是多酶切位点那段的酶切位点去掉是不会不会使目的基因所表达的蛋白质失活的,但是如果是不在多酶切位点的话,就可能使其它的“框架”受到影响,比如amp抗性或者clo抗性的失效（致命影响后期筛选）等.
如果是多酶切位点的话,此区域的酶切位点不可能通过双酶切去掉,所以建议设计合理的pcr引物进行此敲基因操作,这个跟进行定点突变的原理差不多,所以只要设计一个引物就可以了,但是该试剂盒价格比较贵,在两万左右（20次反应）,外加引物设计及后期测序要￥2500左右.
原理：
其实就是PCR反应原理：
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径.双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在DNA聚合酶与启动子的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝.在实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链.因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,并设计引物做启动子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制.通过设计特定的引物来达到改变基因的效果.
具体的说明电邮本人邮箱给你一份说明书吧.
实验器材：
PCR仪（用于pcr反应）、水浴锅（消化未突变质粒DNA）、菌种培养系列设备及实验耗材、试剂.
步骤：
设计引物——》交于生化公司合成引物——》PCR——》消化未突变DNA——》选择宿主菌——》高效感受态制备或购买——》转化——》amp或其它抗性平板涂布——》培养——》单菌落质粒提取——》筛选——》测序确认——》得到目的DNA.
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如果楼主想进一步了解的话可以通过邮箱跟我进行交流.
如果购买的是商业用载体的话,如果是多酶切位点那段的酶切位点去掉是不会不会使目的基因所表达的蛋白质失活的,但是如果是不在多酶切位点的话,就可能使其它的“框架”受到影响,比如amp抗性或者clo抗性的失效（致命影响后期筛选）等.
如果是多酶切位点的话,此区域的酶切位点不可能通过双酶切去掉,所以建议设计合理的pcr引物进行此敲基因操作,这个跟进行定点突变的原理差不多,所以只要设计一个引物就可以了,但是该试剂盒价格比较贵,在两万左右（20次反应）,外加引物设计及后期测序要￥2500左右.
原理：
其实就是PCR反应原理：
DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径.双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在DNA聚合酶与启动子的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝.在实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链.因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,并设计引物做启动子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制.通过设计特定的引物来达到改变基因的效果.
具体的说明电邮本人邮箱给你一份说明书吧.
实验器材：
PCR仪（用于pcr反应）、水浴锅（消化未突变质粒DNA）、菌种培养系列设备及实验耗材、试剂.
步骤：
设计引物——》交于生化公司合成引物——》PCR——》消化未突变DNA——》选择宿主菌——》高效感受态制备或购买——》转化——》amp或其它抗性平板涂布——》培养——》单菌落质粒提取——》筛选——》测序确认——》得到目的DNA.
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如果楼主想进一步了解的话可以通过邮箱跟我进行交流.
将切割后的载体和目的基因放在一起 并加入连接酶,会出现三种环状DNA?
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为什么细菌的dna都是环状的?环状dna有什么优点和缺点?
原核细胞的DNA分子为环状,真核细胞中的DNA分子也有可能是环状吗?
怎么消除酶切位点?要消除载体上的酶切位点,但是不能对其功能有任何影响.说一下大概思路就可以,不一定要很详细.老师给的提示
什么是环状 DNA?
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