PCR引物设计好了,放到NCBI里BLACT为什么没有目的序列呢?

做荧光定量PCR,但是不知道内参的序列,如果NCBI上没有该怎么设计内参的引物呢? PCR引物设计中的问题、保守序列在目的基因内、但是引物为什么在保守序列设计? 从NCBI上查找到的一个目的基因做PCR,设计引物时PCR产物长度是这个基因的全部序列吗? PCR的条件是已知目的基因的核苷酸序列?既然知道目的基因的核苷酸序列,为什么还要设计引物呢?直接根据已知序列写出引物核苷 RT-PCR根据什么序列设计引物 能否用已知植物的某个基因序列设计引物到另一种植物里去PCR,能否得到这个基因的序列呢? 为什么PCR引物设计中引物可以不从扩增序列两头开始?不从两头开始能得到上下游引物以外的序列吗? 请问在ncbi上blast的时候,需要去除pcr扩增引物序列吗? 不知序列的DNA模板PCR引物的设计 ncbi上的基因序列是编码链还是模板链呢?如果通过基因名选择,出来是一个反向的序列,对引物设计有无影响? 麻烦用ncbi设计一对PCR引物,不会用那个程序 做RT-PCR设计引物时,找引物序列有哪些好方法?