RT-PCR退火温度需要根据引物调整吗

上下引物的Tm最好相似,不能差异太大,不然不好设计退火温度；内参条带很亮,说明RT应该没多大问题,问题可能出现在PCR上.没有目的基因是因为1该基因确实不表达；2你的引物不特意,到NCBI的Prime

58C,如果是有模板的话,58C或再低一些都可以,其实退火温度不需要刻意去要求,一般的PCR,52-60C就可以全解决.

退火温度是影响PCR反应特异性的重要因素.引物与模板复性所需要的退火温度取决于引物的长度、碱基组成及其浓度.引物长度越短,引物中G+C的含量越低,所需的退火温度越低.虽然降低退火温度可能增加扩增产量,

不同的PCRMIX所设置的退火温度是不一样的,有的比最低Tm值低5℃,有的低3℃,请你参考你所买的PCRMIX的说明书,上面肯定有详细说明.一般PCR比最低Tm值低1-5℃,都没什么问题.RT-PCR

计算退火温度的方法：1.退火温度＝4×（G＋C）＋2×（A＋T）－（5～8）只是粗算,有时不灵,但比较简便.2.用primer5（oroligo6）计算,引物配对好后,primer5可以显示Tm,我认

分别摸索实验条件测定,根据DNA电泳判断不过其实在做PCR的时候,根据合成的引物中的GC含量可以用公式计算出退火温度,一般比GC计算出的公式低5度比较合适

你做个退火温度的梯度吧!大部分的PCR都有这一功能!退火温度选择一个范围,如50-60度,PCR仪器在一排（12个孔）或一列（8个孔）中每个孔的温度都不同,你在相应的孔中放入待反应的PCR混合液（保证

通常来说,退火温度是由引物的GC%含量决定的,但是反应体系的条件改变也会影响引物的退火温度（如Mg,Na等离子浓度）.建议你去http://www.idtdna.com/analyzer/Applic

唉,这种题就是中国特色,完全理论脱离实际.\x0dPCR退火温度是一个范围,一般是50度到65度,或者到70度做两步法PCR.其中,模板的GC含量、模板的组成（单一模板还是cDNA还是全基因组DNA还

可尝试45-70度设个梯度退火,P一次就知道哪个温度最适合.如没有梯度退火的PCR仪,则可试试两个Tm值中间的温度,一般较多在50、55度可P出来.你试试吧.

退火温度递减的PCR程序叫：降落PCR

变性温度94℃,退火55℃,延伸72℃,复性37℃.

TM值是在一定buffer盐浓度情况下计算出来的.你需要查一下你的PCR体系里buffer盐的浓度,然后找相应的TM值.不过TM值也是一个估算值,举个例子,以你的正向引物而说,TTACAAGATGGA

软件终归是软件,一个PCR体系的具体反应条件不通过实际运行是无法得知最佳退火温度的.建议你做一个梯度PCR摸索一下最佳退火温度.

1、软件预算2、利用梯度PCR优化退火温度

就就低不就高,因为温度高了会使低退火温度的引物掉下来,但是低温度不影响高退火温度的引物结合,但有可能会有非特异扩增.58度肯定可以跑出来,结果如何都是要跑胶看一看再作调整.PS：不管引物公司给的退火温

根据cDNA序列设计就行了,不用加3‘utr,你做载体构建还是tr-pcr基因检测?再问：做rt-pcr检测。我们老板说要加上3‘utr的序列，不知道为什么？再答：不用加，我做rt-pcr检测那么多了

一般用55°,不行的话用58°,再不行的话就设置从58-55的touchdown

说影响得看情况,退火温度太高肯定会影响引物的结合效率的.但是,实际上,好的引物一般是上下游引物的退火温度比较接近.有时候,我们可能会通过牺牲特异性的手段（当GC含量过高时,减少引物长度）来平衡两条引物

计算退火温度的方法：1.退火温度＝4×（G＋C）＋2×（A＋T）－（5～8）只是粗算,有时不灵,但比较简便.2.用primer5（oroligo6）计算,引物配对好后,primer5可以显示Tm,我认