百度作业网退火温度低会对PCR产生什么影响?
来源：学生作业帮 编辑：百度作业网作业帮 分类：生物作业 时间：2024/04/29 04:04:42
退火温度低会对PCR产生什么影响?
我做菌落PCR,使用一个特异性上游引物和一个T7下游通用引物,退火温度用的是较低的48度,但引物的Tm分别为57,71,阳性对照都没有出结果,请问是怎么回事呢?
退火温度过低对PCR会有什么影响呢?
谢谢～～
我做菌落PCR,使用一个特异性上游引物和一个T7下游通用引物,退火温度用的是较低的48度,但引物的Tm分别为57,71,阳性对照都没有出结果,请问是怎么回事呢?
退火温度过低对PCR会有什么影响呢?
谢谢～～
通常来说,退火温度是由引物的GC%含量决定的,但是反应体系的条件改变也会影响引物的退火温度（如Mg,Na等离子浓度）.建议你去http://www.idtdna.com/analyzer/Applications/OligoAnalyzer/分析一下你的PCR体系中的引物退火温度,而不是仅仅由公式计算得出.一般情况下,退火温度过低只会导致反应体系中引物与DNA模板的非特异性结合,致使反应结果中出现大量非特异性结合条带.但是,你所需的产物也应该是包含在其中的,如果完全没有结果,说明你反应体系中其他步骤还存在问题,例如扩增时间等比较关键的步骤.
另：不同的hot taq酶对Tm要求也是不同的.例如今年clontech新出了一种十分nb的hot taq酶,它需要的Tm温度是引物Tm温度再高5度.所以,弄清楚你试剂盒的反应条件要求也是很有必要的...
另：不同的hot taq酶对Tm要求也是不同的.例如今年clontech新出了一种十分nb的hot taq酶,它需要的Tm温度是引物Tm温度再高5度.所以,弄清楚你试剂盒的反应条件要求也是很有必要的...