蛋白质分段盐析原理及实验步骤有哪些?

来源：学生作业帮编辑：百度作业网作业帮分类：生物作业时间：2024/04/30 03:30:53

蛋白质分段盐析原理及实验步骤有哪些?

对分离目的蛋白的盐析,最好采用分段盐析.
由于不同的蛋白质其溶解度与等电点不同,
沉淀时所需的pH值与离子强度也不相同,
改变盐的浓度与溶液的pH值,
可将混合液中的蛋白质分批盐析分开,
这种分离蛋白质的方法称为分段盐析法(fractional saltingout).如半饱和硫酸铵可沉淀血浆球蛋白,
饱和硫酸铵则可沉淀包括血浆清蛋白在内的全部蛋白质.
1.分段盐析的条件先需要进行小实验探索,如：先进行0%-30%
的硫酸铵沉淀,再进行30%-60%的硫酸铵沉淀,
最后进行60%-80%的硫酸铵沉淀.
2.每一段盐析静置之后都将离心取沉淀,透析并检测活性.
通过实验结果可以看出哪一段盐析出来的目的产物最多,
相对来说杂质就更少.
3.比如实验中的活性物质主要在60%-80%这段出来,
在以后的实验中,就可以首先进行0%-60%的硫酸铵沉淀,
这段沉淀物可以抛弃（去处大多数杂质）；然后进行60%-80%
的硫酸铵沉淀,
这段沉淀出来是物质是所需要的目的物质含量比较高的物质,
将其收集进行下一步纯化工作.

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