怎么去除细菌染色体DNA中的质粒DNA?

来源：学生作业帮编辑：百度作业网作业帮分类：语文作业时间：2024/06/01 06:45:13

怎么去除细菌染色体DNA中的质粒DNA?
我的生物分子实验课程的作业要求设计实验方案提取染色体DNA,但是我不知道怎么剔除染色体DNA
下面是书上提供的参考方法：
1 用LB培养基培养细菌：讲保存菌种接种于LB液体培养基,37度,150r/min振摇过夜
2 取1ml菌液,以12000r/min离心5min,弃上清液,将沉淀溶于200ul丙酮中振摇混匀,冰浴5min,以8000r/min离心2min.弃上清液,将沉淀溶于TE缓冲液中(40mmol/LTris,PH8.0),振荡混匀,以8000r/min离心5min讲沉淀重新悬浮于400ul裂解液中（20g/L SDS,20mmol/L乙酸钠 PH5.2 ,40mmol/L Tris PH8.0,10mmol/L EDTA PH8.0）反复吹打混匀.
3 冰浴5min,然后70-70度温育20min,再加入100ul 5mol/L NaCl,以14000r/min 离心10min,上清液中加入100ul 酚-氯仿-异戊醇混合液（25：24：1）,混匀后以8000r/min离心5min.
4 上清液中加2倍体积预冷无水乙醇,以14000r/min离心5min.DNA沉淀溶于500ul 70%乙醇,以10000r/min 离心1-2min.
5 DNA沉淀溶于30ul TE缓冲液,置-20度保存备用.
我觉得这个方法好像没有提出质粒DNA和RNA,还是说他们相对分子质量比染色体DNA小的多,所以在哪部离心中已经被剔除了?

你的表述前后用词矛盾,到底是要提取基因组DNA,还是要提取质粒DNA啊?要去除RNA很简单,加点RNA酶就行了,如果说要去除质粒DNA,这个实验还真奇怪了,你选用没有搭载质粒的菌株提取基因组不就行了么,实在不行,你试试看参考碱裂解小提质粒的方法,然后把上清去除,沉淀里面就有基因组DNA,然后酚氯仿去除蛋白（这方法我可没用过,只是理论可行）,还有一种方法,用trizol,离心分离的时候,DNA存在于有机相,按照说明书回收了,然后过个普通小提试剂盒的亲和层析柱子,那柱子结合不了太大的DNA,但是质粒能结合上去,所以就把质粒DNA去除掉了.（这方法我也没用过,理论可行）.哎,我们都是要提取质粒去除基因组,你是反过来,真没遇到过,因为现在使用的细菌都有空载单纯宿主啊,你别把质粒转进去不就不用去除质粒了么.还有一种更损的招,含有质粒的宿主,你不加相应抗生素,不停传代培养,质粒会在分裂传代过程中丢失,总有一天你会得到一个不含质粒的菌株的,然后提取基因组DNA．
再问：这个是生物分子老师布置的作业，要求提取细菌染色体的DNA。是要提取染色体DNA，不是提取质粒DNA。你的意思是一般从细菌中提取染色体DNA时不用考虑质粒DNA吗？我这方面很外行，不知道有没有必要考虑质粒DNA。碱裂解法提取质粒，沉淀里面除了有基因组DNA，肯定还有细胞碎片和其他杂质吧。去除RNA我也考虑的是用RNA酶，但是不知道RNA酶加在哪一步合适。还涉及到加入之后会不会被后续试剂变性，以及在哪一步去除的问题。
再答：普通细菌体内很少含有质粒DNA的，一般都是人为构建的质粒特意转染进入大肠杆菌等宿主内，为的是扩增或者保存某些基因片段，所以你老师的作业应该没有这层含义，你唯一需要考虑去除的就是蛋白质和RNA，因为细菌体内没有线粒体或者叶绿体这些基因组以外的DNA来源，再说，你们的作业应该没有这么高难度。碱裂解的沉淀里面除了基因组DNA还有蛋白质和盐分沉淀之类的。RNA酶通常在重悬菌液的那一步就可以加进去了，参考质粒小提试剂盒，resuspension solution里面就已经添加RNA酶了，这样在后续步骤去除蛋白质的时候可以顺便把ＲＮＡ酶当作蛋白质去除掉。

怎么去除细菌染色体DNA中的质粒DNA? 在基因工程中通常所使用的质粒是A 细菌的染色体DNA B 细菌染色体外的DNA C 病毒染色体DNA D 噬菌体DNA 细菌细胞中,染色体DNA和质粒DNA在质粒提取过程中发生了什么变化?该变化对质粒检测和分离有什么利用价值质粒属于细菌的基因组吗?基因组的定义是：生物有机体单倍体细胞中的所有DNA,包括核中的染色体DN 【生化】有关细菌质粒DNA提取实验怎么判断DNA 中的RNA 去除干净细菌的质粒中的DNA是双链还是单链?哪一种生物中的DNA分子是单链的? 为什么当宿主细胞是细菌细胞时,质粒不用整合到染色体DNA上?要考试了, 基因工程中的质粒1、目的基因拼接到质粒上后要怎么表达,不是只有核染色体中DNA才可以表达基因吗?2、如果质粒上的目的基因怎样去除DNA中的RNA 质粒DNA在基因工程中的作用提取质粒时这样去除基因组总DNA