百度作业网求细菌穿刺实验详细过程
来源：学生作业帮 编辑：百度作业网作业帮 分类：生物作业 时间：2024/04/30 10:37:28
求细菌穿刺实验详细过程
目的要求
1．掌握脓液及穿刺液的标本采集方法.
2．掌握脓液及穿刺液标本的细菌学检验程序和方法.
器材和试剂
1．标本 穿刺液、脓液或创面分泌物或模拟标本.
2．培养基 血平板、厌氧培养瓶；O-F试验管、KIA、MIU、硝酸盐还原、柠檬酸盐等常用生化反应管.
3．试剂 革兰染色液、3％过氧化氢、1％盐酸四甲基对苯二胺、吲哚试剂、新鲜血浆.
4．其他载玻片、显微镜.
步骤和方法
1．标本采集
(1)腹水：由临床医师无菌采集胸腔或腹腔积液5～10ml,置无菌试管中送检.
(2)封闭性脓肿：在病灶局部外表,消毒后,用无菌方法穿刺抽取脓液5～10ml,置无菌试管中送检.怀疑为厌氧菌感染时,抽取脓液后立即排尽注射器内空气,将脓液注入厌氧运送小瓶中送检.
(3)开放性脓肿：先消毒病灶周围,清理病灶表面,然后用无菌棉签采取病灶深部脓液及分泌物,置无菌试管中送检.
(4)大面积烧伤的创面分泌物：烧伤的部位和创面不同,细菌的种类也不同.故应在多部位用无菌棉签采集标本,放人无菌试管中,注明部位后送检.
(5)瘘管：可用无菌操作采取部分坏死组织,或用无菌棉签挤压瘘管,选取有特征性的如“硫磺颗粒”送检,也可将灭菌纱布条塞入瘘管中,次日取出送检.
2．检验程序见图5—8.
3．常见致病菌的检验及报告方式
(1)肉眼观察：观察标本的性状、颜色及有无放线菌颗粒.标本呈绿色,可能是铜绿假单胞菌感染；有恶臭的标本可能是厌氧菌或变形杆菌感染；脓液中有“硫磺颗粒”,提示放线菌感染.
(2)涂片检查：将标本直接涂片,用革兰染色后镜检,根据镜下细菌的形态和染色特点,可报告“直接涂片找到革兰×性x菌”.
(3)需氧菌培养：通常选用血平板和EMB平板做划线分离,35℃孵育18～24h.观察菌落形态,涂片染色观察.根据菌落形态,涂片染色的结果,初步判断细菌的种类,再按各类细菌的鉴定要点进行鉴定.
1)金黄色葡萄球菌：血平板上中等大小、突起、湿润的圆形菌落,有β溶血环,金黄色或白色菌落.涂片染色镜检为革兰阳性、葡萄状排列球菌；触酶阳性,发酵甘露醇,血浆凝固酶阳性,新生霉素敏感,耐热核酸酶阳性.可报告“检出金黄色葡萄球菌”.
2)铜绿假单胞菌：在血平板上,菌落扁平、边缘不整齐、湿润、向四周扩散、培养基上常有水溶性的蓝绿色色素,有β一溶血环和特殊气味.革兰染色为革兰阴性的直杆菌,两端钝圆.氧化酶阳性、氧化葡萄糖和木糖产酸不产气,还原硝酸盐为亚硝酸盐或产生氮气.利用柠檬酸盐、精氨酸双水解酶阳性.42℃生长.
符合以上鉴定要求的可报告“检出铜绿假单胞菌”.
3)变形杆菌：在血平板上,菌落扁平呈迁徙性弥漫生长,湿润、灰白色.由于细菌蛋白酶的作用,可见有类似溶血的现象,有恶臭.革兰染色为革兰阴性杆菌,多形性；氧化酶阴性、触酶阳性、苯丙氨酸脱氨酶阳性、KIA：K／A、H2S：+、产气；MIU：动力(+)、靛基质 (+)、脲酶(+).符合以上要求可报告“检出普通变形杆菌”.
(4)脓液及穿刺液标本常见的病原菌.见表5—12.
表5-12脓液及穿刺液标本常见的病原菌
革兰阳性细菌 革兰阴性细菌
球菌 金黄色葡萄球菌、化脓性链球菌 肠球菌
杆菌 结核分枝杆菌、炭疽芽胞杆菌 产气荚膜梭菌、破伤风梭菌 溃疡棒状杆菌 变形杆菌、大肠埃希菌 肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌 腐败假单胞菌
其他 放线菌、奴卡菌、念珠菌 阴沟肠杆菌 枸橼酸杆菌 粪产碱杆菌
注意事项
1．脓液及穿刺液标本的性状观察和直接涂片,极其重要.可以指导进一步的检验方向.
2．直接涂片有细菌,而普通需氧培养无细菌生长,应考虑以下情况：①患者正在接受抗菌药物治疗；②可能是厌氧菌感染；③标本处理不当或培养基不合适.
3．接种的平板应培养至48小时后,仍无菌生长.可报告“培养48小时无菌生长”.
再问： 还有一点不太清楚，假如是枯草芽孢杆菌的穿刺培养的话，需要厌氧环境下培养么？
再答： 枯草芽孢杆菌的培养是需要秏氧，因此应在有氧的环境下培养
1．掌握脓液及穿刺液的标本采集方法.
2．掌握脓液及穿刺液标本的细菌学检验程序和方法.
器材和试剂
1．标本 穿刺液、脓液或创面分泌物或模拟标本.
2．培养基 血平板、厌氧培养瓶；O-F试验管、KIA、MIU、硝酸盐还原、柠檬酸盐等常用生化反应管.
3．试剂 革兰染色液、3％过氧化氢、1％盐酸四甲基对苯二胺、吲哚试剂、新鲜血浆.
4．其他载玻片、显微镜.
步骤和方法
1．标本采集
(1)腹水：由临床医师无菌采集胸腔或腹腔积液5～10ml,置无菌试管中送检.
(2)封闭性脓肿：在病灶局部外表,消毒后,用无菌方法穿刺抽取脓液5～10ml,置无菌试管中送检.怀疑为厌氧菌感染时,抽取脓液后立即排尽注射器内空气,将脓液注入厌氧运送小瓶中送检.
(3)开放性脓肿：先消毒病灶周围,清理病灶表面,然后用无菌棉签采取病灶深部脓液及分泌物,置无菌试管中送检.
(4)大面积烧伤的创面分泌物：烧伤的部位和创面不同,细菌的种类也不同.故应在多部位用无菌棉签采集标本,放人无菌试管中,注明部位后送检.
(5)瘘管：可用无菌操作采取部分坏死组织,或用无菌棉签挤压瘘管,选取有特征性的如“硫磺颗粒”送检,也可将灭菌纱布条塞入瘘管中,次日取出送检.
2．检验程序见图5—8.
3．常见致病菌的检验及报告方式
(1)肉眼观察：观察标本的性状、颜色及有无放线菌颗粒.标本呈绿色,可能是铜绿假单胞菌感染；有恶臭的标本可能是厌氧菌或变形杆菌感染；脓液中有“硫磺颗粒”,提示放线菌感染.
(2)涂片检查：将标本直接涂片,用革兰染色后镜检,根据镜下细菌的形态和染色特点,可报告“直接涂片找到革兰×性x菌”.
(3)需氧菌培养：通常选用血平板和EMB平板做划线分离,35℃孵育18～24h.观察菌落形态,涂片染色观察.根据菌落形态,涂片染色的结果,初步判断细菌的种类,再按各类细菌的鉴定要点进行鉴定.
1)金黄色葡萄球菌：血平板上中等大小、突起、湿润的圆形菌落,有β溶血环,金黄色或白色菌落.涂片染色镜检为革兰阳性、葡萄状排列球菌；触酶阳性,发酵甘露醇,血浆凝固酶阳性,新生霉素敏感,耐热核酸酶阳性.可报告“检出金黄色葡萄球菌”.
2)铜绿假单胞菌：在血平板上,菌落扁平、边缘不整齐、湿润、向四周扩散、培养基上常有水溶性的蓝绿色色素,有β一溶血环和特殊气味.革兰染色为革兰阴性的直杆菌,两端钝圆.氧化酶阳性、氧化葡萄糖和木糖产酸不产气,还原硝酸盐为亚硝酸盐或产生氮气.利用柠檬酸盐、精氨酸双水解酶阳性.42℃生长.
符合以上鉴定要求的可报告“检出铜绿假单胞菌”.
3)变形杆菌：在血平板上,菌落扁平呈迁徙性弥漫生长,湿润、灰白色.由于细菌蛋白酶的作用,可见有类似溶血的现象,有恶臭.革兰染色为革兰阴性杆菌,多形性；氧化酶阴性、触酶阳性、苯丙氨酸脱氨酶阳性、KIA：K／A、H2S：+、产气；MIU：动力(+)、靛基质 (+)、脲酶(+).符合以上要求可报告“检出普通变形杆菌”.
(4)脓液及穿刺液标本常见的病原菌.见表5—12.
表5-12脓液及穿刺液标本常见的病原菌
革兰阳性细菌 革兰阴性细菌
球菌 金黄色葡萄球菌、化脓性链球菌 肠球菌
杆菌 结核分枝杆菌、炭疽芽胞杆菌 产气荚膜梭菌、破伤风梭菌 溃疡棒状杆菌 变形杆菌、大肠埃希菌 肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌 腐败假单胞菌
其他 放线菌、奴卡菌、念珠菌 阴沟肠杆菌 枸橼酸杆菌 粪产碱杆菌
注意事项
1．脓液及穿刺液标本的性状观察和直接涂片,极其重要.可以指导进一步的检验方向.
2．直接涂片有细菌,而普通需氧培养无细菌生长,应考虑以下情况：①患者正在接受抗菌药物治疗；②可能是厌氧菌感染；③标本处理不当或培养基不合适.
3．接种的平板应培养至48小时后,仍无菌生长.可报告“培养48小时无菌生长”.
再问： 还有一点不太清楚，假如是枯草芽孢杆菌的穿刺培养的话，需要厌氧环境下培养么？
再答： 枯草芽孢杆菌的培养是需要秏氧，因此应在有氧的环境下培养