用PAGE胶跑DNA的话,那和western blot中跑蛋白的胶有何不同?例如胶的配法、浓度、上样量、用多少电压等,而
来源:学生作业帮 编辑:百度作业网作业帮 分类:综合作业 时间:2024/06/14 07:52:54
用PAGE胶跑DNA的话,那和western blot中跑蛋白的胶有何不同?例如胶的配法、浓度、上样量、用多少电压等,而且marker没有颜色,怎么知道跑到了哪里?
![用PAGE胶跑DNA的话,那和western blot中跑蛋白的胶有何不同?例如胶的配法、浓度、上样量、用多少电压等,而](/uploads/image/z/6445340-44-0.jpg?t=%E7%94%A8PAGE%E8%83%B6%E8%B7%91DNA%E7%9A%84%E8%AF%9D%2C%E9%82%A3%E5%92%8Cwestern+blot%E4%B8%AD%E8%B7%91%E8%9B%8B%E7%99%BD%E7%9A%84%E8%83%B6%E6%9C%89%E4%BD%95%E4%B8%8D%E5%90%8C%3F%E4%BE%8B%E5%A6%82%E8%83%B6%E7%9A%84%E9%85%8D%E6%B3%95%E3%80%81%E6%B5%93%E5%BA%A6%E3%80%81%E4%B8%8A%E6%A0%B7%E9%87%8F%E3%80%81%E7%94%A8%E5%A4%9A%E5%B0%91%E7%94%B5%E5%8E%8B%E7%AD%89%2C%E8%80%8C)
首先原理差不多,具体细节差异还是有的.
跑DNA的话,可以参见 人家做AFLP的protocol,当然也要看你想分离的片断大小咯.
两者都要用到丙烯酰胺、甲叉丙烯酰胺、TEMED、APS(10%)
但是跑DNA一般用 TBE(Tris 、硼酸、EDTA),还含尿素
用于western的蛋白胶多用 Tris-HCl,SDS buffer.蛋白较一般有分离胶和浓缩胶.
浓度看分离的东西;上样量的话其实没法比较,染色的方法不一样,DNA银染的话少上点,具体多少我也记不清了,自己查一下吧;如果说是上样体积,看你的梳子大小咯
电压:AFLP要求DNA要预电泳,冲洗掉尿素后再插梳子,60W 2h;当二甲苯青跑到底部约1/3处终止电泳.
DNA的loading buffer含染料 溴酚蓝、二甲苯青等来指示跑到哪里呢.
跑DNA的话,可以参见 人家做AFLP的protocol,当然也要看你想分离的片断大小咯.
两者都要用到丙烯酰胺、甲叉丙烯酰胺、TEMED、APS(10%)
但是跑DNA一般用 TBE(Tris 、硼酸、EDTA),还含尿素
用于western的蛋白胶多用 Tris-HCl,SDS buffer.蛋白较一般有分离胶和浓缩胶.
浓度看分离的东西;上样量的话其实没法比较,染色的方法不一样,DNA银染的话少上点,具体多少我也记不清了,自己查一下吧;如果说是上样体积,看你的梳子大小咯
电压:AFLP要求DNA要预电泳,冲洗掉尿素后再插梳子,60W 2h;当二甲苯青跑到底部约1/3处终止电泳.
DNA的loading buffer含染料 溴酚蓝、二甲苯青等来指示跑到哪里呢.
用PAGE胶跑DNA的话,那和western blot中跑蛋白的胶有何不同?例如胶的配法、浓度、上样量、用多少电压等,而
western 想分开65和93kd的蛋白用多大浓度的分离胶
western blot蛋白样品用什么稀释至一样的浓度,还有就是蛋白maker如何稀释至一样的体积?
western blot 一抗孵育,为什么不可以将一抗和分析的蛋白样品一起先孵育,后page 电泳,这样更节约一抗?
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请问做Western blot非要测样品的浓度吗 一般用什么方法测 蛋白加样缓冲液的作用是什么
western blot中蛋白样品浓度怎样稀释?用PBS稀释吗?
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