实时荧光定量pcr两步法与三步法的异同是什么?如何选择使用?比如引物退火是54度,选择三步法还是2步法?

来源：学生作业帮编辑：百度作业网作业帮分类：综合作业时间：2024/04/29 20:42:30

异同?我觉得还是看你用的机器和试剂盒吧,主要是那个聚合酶的要求.有的推荐两步法,有的推荐三步法.
比如,ABI,roche都推荐两步法,tiangen的推荐三步法.
我觉得,如果引物设计时的Tm值如果接近60度（比如用ABI的primer express设计的引物）,就直接用两步法；如果Tm值不太符合两步法要求,即60度,还是三步法好些!
再问：谢谢师兄！我今天做预实验，退火温度54度，用2步法扩增效率确实太差，下午用三步法做了下，明显效果提高。但是因为封口胶没贴紧，液体跑了，所以结果也不是太好！早点提问就好了，浪费了不少试剂，呵呵，非常感谢！
再答：你是用的96孔板吧，这个在贴封口膜时，一定要用刮板来回刮紧，再对着光线看孔口是否封好。如果怕封口膜被污染，可以在封口膜上放一个干净的一次性手套，再用刮板刮。祝你试验成功！多学多问加实践，肯定能出好结果！

实时荧光定量pcr两步法与三步法的异同是什么?如何选择使用?比如引物退火是54度,选择三步法还是2步法? PCR的两步法和三步法有什么区别有用过博陵科为的两步法荧光定量反转录PCR试剂盒的吗? 两步法荧光定量耐热反转录PCR试剂盒一般大家都买哪家的啊?哪个公司的价格公道,性价比高? 博凌科为的THERMOscript SYBR Green qRT-PCR Kit（两步法荧光定量耐热反转录试剂盒）主要博凌科为的TUREscript SYBR Green qRT-PCR Kit（两步法荧光定量反转录试剂盒）怎么样? 三阶魔方公式（七步法）要字母的我买的RT-PCR两步法试剂盒里有随机引物还有Oligo(dT)用哪个好呢解一元一次不等式组的一般步骤,常用三步法魔方怎样快速拼好七步法的第一步如何稀释实时荧光定量PCR的引物? 三阶魔方盲拧入门四步法中的四个公式?